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蛋白质和多肽N-端测序技术是以Edman化学降解法为基础,其基本原理包括通过异硫氰酸苯脂与蛋白质或多肽的N-端残基的偶联,苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)环化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)转化为苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三个主要化学步骤,每个循环从蛋白质或多肽裂解一个氨基酸残基,同时暴露出新的氨基酸进行下一个Edman降解,最后用HPLC法鉴定PTH-氨基酸,实现蛋白质序列的测定。公司引进的PPSQ-33A蛋白序列测序系统可完成全程工作,一次可以连续测定20个以上氨基酸。
实验原理
仪器设备
PPSQ-33A 全自动蛋白质多肽测序仪,SHIMADZU
项目名称 | 内容 | 服务周期 |
蛋白转膜 | 蛋白转至PVDF膜 | 1~2周 |
氨基酸N端测序 | 使用PPSQ-33A蛋白序列测序系统完成全程工作,一次可测定20以下的氨基酸 | 4~5周 |
提供样品
蛋白样品,状态:干粉、溶液或固定于PVDF膜上;
浓度及纯度:总量>100~200 pmol,纯度>90%,浓度>1 mg/ml;
含盐量:挥发无极盐<20 mM,不挥发无机盐<5 mM
提供信息
样品表观分子量范围;如已知序列,请提供理论序列信息;样品需要转膜制备时,提供相应电泳方法与带有Marker的电泳照片;样品制备方法、纯度检测方法及结果图谱数据;样品如被修饰,请详细告知修饰方法
纯蛋白质N-端氨基酸序列;HPLC色谱图、所测N-端部分氨基酸序列、方法的基本描述
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